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人体组织纤溶酶原激活物(t
来源:365bet网上娱乐平台 作者:365bet指数 发布时间:2019-08-04 阅读次数:888
特异性:
该测定法对于检测人(人)PLAT具有高灵敏度和指数特异性。
在PLAT和同性恋者(人类)的数据之间未观察到显着的交叉反应性或干扰。
精度:
测定内准确度(一次测试的准确度):CV%8%将三个已知浓度的样品在板上测试两次并评价。
测试到测试的准确度(测试到测试精度):CV%10%在20次测试中分析了三个已知浓度的样品。
样品收集和储存
血清:使用血清分离管(SST),使样品在4℃下在室温下凝结过夜2小时,然后以1000×g离心15分钟。
立即和口服消除人体残留物,并将样品储存在-20°C-80°C
避免反复冻融。
血浆:EDTA血浆或肝素酸抗凝血剂的收集。
在1000×gat 2-8℃下离心15分钟,收集30分钟。
立即在-20°C至-80°C下测试口服分级储存和样品。
避免反复冻融。
检测步骤
使用前将所有试剂和样品置于室温。
在开始测试之前再次离心样品。
建议一式两份地分析所有样品和标准品。
1)
准备上一节中列出的所有试剂,工作标准和样品。
2)
再次检查测试设计表以确定使用的孔数,袋中保留的粘合剂和背面的粘合剂层,密封ziploc,并将未使用的孔储存在4°C。
3)
每孔加入100μl标准溶液和样品。
用附带的胶带覆盖。
在37℃下孵育2小时。
分配板提供标准记录和分析样品。
4)
从每个井中清除液体,不要清洗。
5)
每孔加入100μl生物素抗体(1×)。
盖上机智酒胶条。
在37℃下孵育1小时。
(生物素抗体(1x)可能看起来不透明。
在室温下加热并混合直至溶液看起来均匀。
6。
将清洁溶液在紧密区域上抽真空并重复该过程两次,共洗涤3次。
使用水瓶,多通道移液器,多分配器,水洗,支撑架,用洗涤缓冲液(200μl)彻底清洗2分钟。。
最后一次洗涤后,通过抽吸或倾析除去任何剩余的洗涤缓冲液。
将盘子和槽插在干净的纸巾上。
7)
每孔加入100μlHRP抗生物素蛋白(1×)。
用新的粘合剂条覆盖微量滴定板。
在37℃下孵育1小时。
8)
如步骤6中那样重复抽吸/洗涤过程5次。
9)
每孔加入90μlTMBS底物。
在37°C孵育15-30分钟。
避光。
10)
每孔加入50μl的StopSolution,轻轻触摸平板,确保混合。
11)
使用设定在450nm的酶标仪在5分钟内确定每个孔的光密度。
如果可以进行波长校正,则设置为540 nm或570 nm。
从450nm处的读数减去540nm或570nm处的读数。
该减法对于板上的光学缺陷是正确的。
在没有校正的情况下直接在450nm处读取的读数可以是大且准确的。
计算结果:
使用CurveExpert 1 Professional。
建议使用三条标准曲线。这可以从我们的网络下载。
显示和减去每个标准的重复测量值的平均值和标准光密度的平均值
使用可以生成四参数逻辑曲线调整(PL)的计算机通过减少数据来创建标准曲线。
或者,通过绘制六边形轴上每个标准之前的平均吸光度与轴上的浓度绘制标准曲线,并绘制通过图上点的最佳曲线拟合。
可以通过将PL记录密度记录与O记录进行绘图来对数据进行分类。
D.
最佳拟合线可以通过回归分析确定。
此过程将提供准确但足够的数据拟合。
如果样品被稀释,则从标准曲线读取的浓度必须乘以溶解因子。


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